PCR 条件
<VDR WT/fl PCR>
10X Buffer 2.5 uL
dNTP 0.25 uL
primer F (TEI FS2) 0.25 uL
primer R (TEI AS2) 0.25 uL
std.H2O 20.65 uL
Taq 0.1 uL
Total 24 uL
<VDR KO PCR>
10X Buffer 2.5 uL
dNTP mix 0.25 uL
primer F (TEI FS2) 0.25 uL
primer R (in2 AS2) 0.25 uL
std. H2O 20.65 uL
Taq 0.1 uL
Total 24uL
<VDR fl digest>
VDR fl PCR終了後、チューブの蓋を開け、以下のdigest mixを25Lずつ加え、37℃にて 3時間、dry oven内でインキュベートし、電気泳動を行う。
H Buffer 5 uL
EcoRI 0.1 uL
std. H2O 19.9 uL
Total 25 uL
<vill cre PCR>
10X Buffer 2.5 uL
dNTP mix 0.5 uL
primer F (F) 0.5 uL
primer R (R) 0.5 uL
std. H2O 19.9 uL
Taq 0.1 uL
Total 24uL
<ckm cre PCR>
10X Buffer 2.5 uL
dNTP mix 0.5 uL
primer F (F) 0.5 uL
primer R (R) 0.5 uL
std. H2O 19.9 uL
Taq 0.1 uL
Total 24 uL
<Camp PCR>
KAPA2G mix 6 uL
primer F (camp mu F) 0.3 uL
primer R (camp mu R) 0.3 uL
std. H2O 4.4 uL
Total 11 uL
<Enpp1 asj PCR>
KAPA2G mix 6 uL
primer F (F) 0.6 uL
primer R (R) 0.6 uL
std. H2O 3.8 uL
Total 12 uL
<Enpp1 digest>
Enpp1 asj PCR終了後、チューブの蓋を開け、以下のdigest mixを25Lずつ加え、thermal cyclerのenpp1 digest プログラムにてインキュベート、終了後に電気泳動
Cut SMART Buffer 1.2 uL
Taqa1 1 uL
std. H2O 5.8 uL
Total 8 uL